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气一液层析纯化能得到很高的分辨率和灵敏度




来源:yiyi
时间:2017-7-7 23:49:45

气一液层析纯化能得到很高的分辨率和灵敏度

    采用任何纯化操作不可避免地会丢失一些物质。纯化的
步骤应越少越好,这一点很重要。因此,所用的技术必须对小
量的物质能给出最大的分辨率。薄层层析、气一液层析、醋酸
纤维素电泳、圆盘电泳、离子交换和亲和层析等技术是非常适
用的。最好的方法可能是气一液层析(在能适用的情况下),因
为它能得到很高的分辨率和灵敏度,并且可用于定性和定量
的分析。在这方面氮气检测器特别优越,因为预纯化所需要
的量最小。
    在能使用的情况下,亲和层析是十分有用的,因为它是以
生物特异性为基础。从理论上讲它能给出绝对的纯化作用和
很高的产率。这项技术的潜力至今还没有充分的发挥,特别
是在用于大量物质的分离方面。液一液分配层析、吸附柱层析
和通透层析技术一般不作为分析性分离,因为它们的分辨能
力一般较低,并且可能发生物质的显著丢失。

制备性分离
    高分辨率的分离方法一般具有有限的能力,不能用于大
量物质的分离。因此,在制备性分离中,通常先使用大容量的
方法,因而可能分辨率很低。所以,沉淀、透析、吸附、液一液分
配柱层析和逆流分溶等技术是重要的,因为,虽然它们不可能
达到其他方法那样好的分辨率,但它们能按比例地增加来对
付大量的物质。然后,可以使用一些高分辨率的方法,如离子
交换、制备性凝胶电泳和制备性气一液层析,用作最后的纯化。
    分离所用的方法应尽可能地根据许多不同的特性为基
础。当使用现代分离技术时,在使用了一种特殊的方法以后,
接着使用一种按相同物理特性来分离的方法是很难得到进一
步的纯化。
    面临着要选择一种特殊的方法(或一些方法)来纯化一种
化合物,很明显的,虽然理论上可以使用几种技术,但实际上,
某些技术可能更好一些。在决定采用哪一种技术时,应当考
虑到一些因素,包括:
    (1)是分析性的分离,还是制备性的分离,以便考虑技术
的分辨率和(或)能力,
    (2)化合物的物理特性,如溶解度、挥发性、分子量和电
荷特性,
    (3)化合物在特殊处理时的稳定性,
    (4)考虑文献中所记载过的比较成功的分离方法,
    (5)设备和技术条件,
    (d)方法的费用。

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