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www.w88981.com,优德官方网站下凝胶特征-琼脂糖是从海藻中提取多糖




来源:yiyi
时间:2017-7-4 0:25:43

凝胶的特征-琼脂糖是从海藻中提取的多糖

电泳法分离核酸
    电泳法在分离和纯化生物大分子方面应用广泛,尤其是蛋白质
和核酸方面的应用。这些带电物质的分离,是因为在直流电场下它
们在缓冲液中具有不同的迁移速率。由于核酸分子的磷酸骨架带有
负电荷,所以在电泳过程中核酸会向正极移动;另外蛋白质为两性
物质,根据其带电性质可确定其迁移方向。

    凝胶电泳法提纯核酸
    凝胶电泳可通过DNA的大小将其分离二凝胶中加入DNA片段后在
凝胶两端施加电位,因为DNA分子带负电,它会向正极移动;而受
到凝胶基质的阻碍,较大的片段移动减慢,较小的片段则移动较快
。带有阻力的凝胶相当于分子筛,从而依据片段大小将其分离,大
分子迁移率取决于凝胶聚合强度、分子大小和形状以及缓冲液的离
子强度和温度。染色后,分离的大分子会在凝胶上显示为从一端到
另一端的一系列条带。

    凝胶电泳分离法最常用的琼脂糖凝胶电泳.带眼井的凝胶薄板
可以作为样品的载体,它浸没在一定pH值和离子强度的缓冲液中。
用染色剂(如5μm/mL EB)进行染色,可通过观察荧光来检测DNA。
电泳后向DNA样本中加入载体染料,相当于将DNA标记;染料中也含
有甘油和蔗糖,可将提高样本的密度,使其沉淀到凝胶的井底?常
用的两种凝胶为琼脂糖和聚丙烯酰胺。

凝胶的特性

    琼脂糖是一种从海藻中提取的平均分子量为12000的线性多糖
,它由琼脂的重复单位组成,由半乳糖和3,6一葡萄糖分子交替构
成。琼脂糖所用的浓度一般在0.5%~3%之间、琼脂糖凝胶是将
粉末状的琼脂糖凝胶溶解于缓冲液中煮沸后形成无色溶液,冷却后
倒出形成凝胶块,琼脂糖凝胶块易碎,操作时应小心,避免其被破
坏二琼脂糖浓度越高,凝胶块就越硬,形成的孔径就越小。大分
子的电泳迁移率与其能通过孔径的体积分数成正比。加入适当浓
度的琼脂糖,施加合适的电场,可分离长度在200~50000bp范围内
的DNA片段;应用脉冲场凝胶电泳(电泳槽中电流方向周期性变化)
可以分离50000~5000000bp的超大片段核酸。琼脂糖凝胶电泳比聚
丙烯酰胺凝胶电泳速度快,然而前者因为孔径较大,所以分离能
力较后者低.在一定的琼脂糖浓度下,待检测的DNA片段迁移率与D
NA片段长度(bp)的对数呈线性关系

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